Contente
- Instruções
- Preparando extrato de batata
- Preparando a mistura
- Esterilização
- Vertendo a mistura
- Dicas
- Aviso
- O que você precisa
Ágar batata dextrose (BDA) é um bom meio de propósito geral semissólido usado para criar fungos. Também é frequentemente utilizado para isolar, crescer e manter espécies de cogumelo em formação. Pratos prontos de petri ou tubos contendo BDA podem ser comprados, ou o BDA pode ser rapidamente feito usando uma pré-mistura comercial. No entanto, não é difícil fazer uma versão simples e eficaz com um baixo custo.
Instruções
Batata (Zedcor Wholly Owned/PhotoObjects.net/Getty Images)-
Coloque as batatas em uma panela com cerca de 1,2 litros de água da torneira e deixe ferver em um fogão por uma hora.
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Tire a panela do fogo e deixe esfriar o líquido até que ele possa ser manuseado confortavelmente (cerca de dez minutos).
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Despeje o extrato de batata líquido através de um filtro ou gaze e recolha-o para outro recipiente.
Preparando extrato de batata
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Adicione dextrose e ágar a um litro de água do extrato de batata.
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Teste o pH da solução com papel testador de pH ou medidor de pH.
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Se o pH estiver acima de 6,5, diminua-o, adicionando uma gota da solução de ácido clorídrico de cada vez e fazendo um novo teste.
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Se o pH for inferior a 6, ajuste-o adicionando uma gota de solução de hidróxido de sódio de cada vez e fazendo um novo teste.
Preparando a mistura
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Misture bem e divida-o em lotes menores de 250 mililitros. Despeje em quatro frascos de 500 ml (cada frasco deve estar cheio até a metade para não ferver).
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Cobra cada frasco com um pedaço de papel de alumínio dobrado livremente, de modo que a película não caia, mas também não faça uma vedação completa.
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Coloque os frascos em uma panela de pressão.
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Opere a panela de pressão de acordo com as instruções do fabricante para esterilizar o BDA a 121º C a uma pressão de 103,421 Pa (15 psi) durante 15 minutos.
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Desligue a panela de pressão e deixe-a voltar à pressão atmosférica, em seguida, retire os frascos e deixe esfriar até que eles possam ser manipulados.
Esterilização
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Alinhe os pratos de petri sobre uma superfície plana.
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Uma vez que os frascos foram arrefecidos à temperatura de manuseamento, mas antes que o meio comece a solidificar, segure o frasco com uma das mãos e retire a tampa de folha com a outra mão.
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Para cada prato de petri, tire a tampa com uma das mãos, rapidamente encha até a metade com BDA líquido e recoloque a tampa.
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Repita o passo 3 acima até que todos os pratos de Petri estejam preenchidos.
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Se houver qualquer sobra de BDA, recupere o frasco com a tampa da folha original, deixe esfriar e solidificar, aperte a tampa de alumínio e guarde em uma geladeira.
Vertendo a mistura
Dicas
- A maioria dos fungos cresce bem em condições ligeiramente ácidas, de modo que o valor final de pH deve estar compreendido entre 6 e 6,5, embora possa ser ajustado para qualquer pH necessário para uma espécie específica.
- Deixe as tampas do prato de petri aberta apenas o suficiente para permitir que a mistura a ser vertida para dentro e seja coberta o mais rápido possível.
- É preciso prática para ganhar velocidade e eficiência no derramamento de ágar em pratos de petri.
- Após arrefecimento e solidificação, os pratos de BDA podem ser embrulhados em plástico e armazenados no frigorífico durante meses.
- A maioria das águas da torneira contém minerais benéficos para o crescimento de fungos, no entanto, se a água local tiver as concentrações de minerais extremas ou um pH muito elevado ou baixo, substitua por água destilada.
Aviso
- Siga todas as instruções de operação e segurança do modelo de panela de pressão a ser utilizado.
- Deixe as tampas do frasco soltas quando for esterilizar na panela de pressão para evitar a super pressurização.
- Use luvas resistentes ao calor quando manusear recipientes quentes.
- Use óculos de segurança quando operar a panela de pressão, quando for remover o BDA esterilizado e durante o vazamento.
O que você precisa
- 300 g de batatas descascadas e cortadas
- Panela
- Coador de cozinha
- Papel testador pH ou medidor de pH
- 1 molar de ácido clorídrico
- 1 molar de hidróxido de sódio
- 4 frascos de vidro de 500 ml Ehrlenmayer (ou outros recipientes de boca estreita autoclaváveis)
- 10 g de dextrose (glicose) em pó
- 20 g de ágar
- Papel alumínio
- Panela de pressão
- Placas de petri estéreis